鄧瑞春¹，周勇²，張文生¹，徐建國(guó)³，尚靖³，王旭丹²，于魯海³
1 、北京師范大學(xué)資源學(xué)院資源藥物與中藥資源研究所，北京 100875；
 2 、北京中醫(yī)藥大學(xué) 中西醫(yī)結(jié)合研究所，北京 100875；
 3 、新疆自治區(qū)人民醫(yī)院 · 臨床藥學(xué)研究所，鳥魯木齊 830001

人類白癜風(fēng)是一種頑固性皮膚病，病因尚不清楚，發(fā)病機(jī)制至少涉及4種學(xué)說，即自身免疫、 神經(jīng)體液因素、自身細(xì)胞毒和接觸外源性物質(zhì)等。近年來普遍認(rèn)為自身免疫學(xué)說是白癜風(fēng)的主要發(fā)生機(jī)制。驅(qū)蟲斑鳩菊( V e r n o n i a a n t h e l mi n t i c a  w i l l d，V W)注射液自新疆特有菊科植物驅(qū)蟲斑鳩菊的種子中提取，主要成分黃酮含量為 3 g/L。多年臨床應(yīng)用顯示，該藥對(duì)白癜風(fēng)具有明顯的治療效果。考慮到該藥治療白癜風(fēng)可能與機(jī)體免疫系統(tǒng)有關(guān)，我們著重研究了該藥對(duì)正常小鼠免疫系統(tǒng)、酪氨酸酶的合成及其 mR N A表達(dá)的影響，以作用機(jī)制，為在臨床上廣泛應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    本文進(jìn)行一系列實(shí)驗(yàn)探討VW對(duì)小鼠免疫功能的影響：淋 巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)測(cè)定小鼠脾T、B細(xì)胞增殖活性；脾細(xì)胞介導(dǎo)羊紅細(xì)胞定量溶血分光光度法測(cè)定B細(xì)胞生成抗體活性，流式細(xì)胞法測(cè)定B細(xì)胞上 CD19表達(dá)活性；遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)試驗(yàn)測(cè)定T細(xì)胞活性、【³H】- Td R摻入法測(cè)定T細(xì)胞分泌 IL-2活性等。然后用酶學(xué)方法研究VW對(duì)小鼠體內(nèi)酪氨酸酶的作用。用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)檢測(cè)酪氨酸酶基因表達(dá)活性。結(jié)果表明，VW可以明顯抑制小鼠體內(nèi)T、B細(xì)胞的增殖反應(yīng)( P<0.01) ；對(duì)綿羊紅細(xì)胞 (SRBC) 誘導(dǎo)的正常小鼠脾臟抗體形成細(xì)胞活性、 CD19 B細(xì)胞亞類表達(dá)、小鼠DTH反應(yīng)和T細(xì)胞分泌IL-2活性也具 有明顯的抑制作用，這些抑制作用與藥物濃度有一定的劑量效應(yīng)關(guān)系。VW 還可以提高小鼠血清酪氨酸酶活性，增強(qiáng)酪氨酸酶基因的表達(dá)。以上結(jié)果說明，VW可抑制小鼠免疫功能，可以從轉(zhuǎn)錄水平增強(qiáng)酪氨酸酶活性，進(jìn)而促進(jìn)黑素合成。

國(guó)外已將Smyth line (SL) 雞作為研究白癜風(fēng)的動(dòng)物模型，也是很好的人類自身免疫性白癜風(fēng)的動(dòng)物模型，但目前該動(dòng)物模型尚未引入我國(guó)。因此我們采用了正常動(dòng)物BAI.B/c小鼠作為研究對(duì)象，初步探討VW對(duì)免疫功能以及黑素合成的影響。

    近年研究發(fā)現(xiàn)，白癜風(fēng)患者的免疫功能常出現(xiàn)異常，與正常人相比較，白癜風(fēng)患者血清器官特異性抗體（包括抗黑素細(xì)胞的抗體）的陽性率明顯增高，外周血T細(xì)胞及其亞群也有異常改變，提示白癜風(fēng)可能是一種自身免疫疾病。

    我們?cè)�發(fā)現(xiàn)，VW在0.025-25g/L范圍內(nèi)可明顯抑制正常小鼠脾T、B細(xì)胞的增殖反應(yīng)，是脾臟指數(shù)與胸腺指數(shù)下降，并可抑制正常小鼠血清IgG，IgM，IgN，以及小鼠抗人A375黑素癌細(xì)胞抗體（總IgG含量及特異性IgG）。可見，VW可在器官與分子等不同水平對(duì)免疫功能產(chǎn)生影響。

    本實(shí)驗(yàn)中，我們進(jìn)一步觀察了VW對(duì)小鼠免疫功能的影響。VW3種劑量組（編者注：低劑量組 87.5mg/kg，為臨床用量的5倍；中劑量組175mg/kg,為臨床用量的10倍；高劑量組350mg/kg,為臨床用量的20倍；正常對(duì)照組注射等劑量生理鹽水。）均可明顯抑制正常小鼠脾臟T、B細(xì)胞的增殖，使B細(xì)胞上CD19表達(dá)量降低；DTH受到抑制，小鼠脾T細(xì)胞分泌IL-2的活性下降。

    黑素為吲哚和醌與蛋白質(zhì)結(jié)合的高分子聚合物。黑素的合成必須具備以下3種基本物質(zhì)：酪氨酸（制造黑素的主要原料，是蛋白質(zhì)代謝的產(chǎn)物）、酪氨酸酶（酪氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)楹谒氐拇呋瘎�，為銅及蛋白質(zhì)的復(fù)合物，在黑素細(xì)胞的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中合成）、 氧 (酪氨酸必須與氧結(jié)合才能在酪氨酸酶的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)楹谒?/span>) 。其中，酪氨酸酶在黑素合成過程中起關(guān)鍵性的限速酶作用。徐建國(guó)等報(bào)道，V W在體外可激活酪氨酸酶的活性。本研究也證明V W 3個(gè)劑量組均可明顯促進(jìn)小鼠血清酪氨酸酶活性，并且證明這種作用可在轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生，從而加速黑素的合成。 

    以上結(jié)果提示，V W對(duì)白癜風(fēng)的治療作用，可能通過2方面發(fā)揮作用：一是抑制機(jī)體的免疫功能，降低機(jī)體對(duì)自身組織(如黑素細(xì)胞) 的免疫應(yīng)答，從而減少自身黑素細(xì)胞的破壞；二是可促進(jìn)酪氨酸酶的合成和降低其分解，促進(jìn)酪氨酸的氧化，進(jìn)而促進(jìn)黑素的合成。 

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